surePAGE預(yù)制膠使用指南及答疑集錦

FAQ：
1.     {C}surePAGE預(yù)制膠在使用前需要特別處理嗎？
預(yù)制膠產(chǎn)品打開包裝即可用于蛋白電泳實驗，但請一定撕掉膠板底部綠色封口膠帶。 并請檢查電泳槽密封條是否需要翻轉(zhuǎn)，以保證內(nèi)槽密封。
2.     {C}surePAGE預(yù)制膠能否用于非變性電泳？
可以用于非變性電泳。非變性電泳由于受蛋白質(zhì)的亞基及電荷量少的影響，存在條帶偏移率低（泳動速度慢）、條帶不夠鋒利等現(xiàn)象。由于非變性電泳時間較長，請根據(jù)實驗設(shè)計先進(jìn)行電泳條件優(yōu)化。
3.     {C}應(yīng)該使用什么電泳緩沖液?
推薦使用MOPS電泳緩沖液。對于小分子量蛋白，請使用MES緩沖液。請勿使用Tris甘氨酸電泳緩沖液。
4.     {C}跑完一塊膠需要多久?
電泳時間取決于選取的電泳緩沖液、凝膠濃度以及興趣蛋白的分子量大小。在MOPS電泳緩沖液，140V恒壓條件下，電泳時間通常是50分鐘。一片凝膠電泳時，初始電流大約在70-100mA。適當(dāng)提高電泳儀輸出電壓設(shè)定，可以縮短電泳時間。但高電壓會引起電泳實驗體系溫度上升，導(dǎo)致電泳過程出現(xiàn)不可預(yù)料的情況。不推薦超過180V的電壓設(shè)定。
5.     {C} surePAGE預(yù)制膠可以用于哪些電泳槽?
只要是兼容10 x 8 cm或10 x 10 cm 丙烯酰胺凝膠的垂直型電泳槽， 預(yù)制膠都有良好的兼容性。
6.     {C}為什么在蛋白轉(zhuǎn)印時凝膠變的很粘?
低濃度凝膠質(zhì)地較軟，轉(zhuǎn)膜時易受熱，與轉(zhuǎn)印膜粘連。
7.     {C}其他公司的出品的染料是否可以用于surePAGEf預(yù)制膠染色？
每家公司的蛋白染料產(chǎn)品配方不同。以考馬斯亮藍(lán)G250或R250為主要成分的染色液與本預(yù)制膠產(chǎn)品兼容性較好。
8.     {C}過夜脫色會影響條帶的銳度嗎？
不同的脫色液配方會影響脫色效果。推薦用于過夜脫色的脫色液配方是：15%乙醇，10%乙酸的水溶液。
9.     {C}SurePAGE預(yù)制膠在室溫下穩(wěn)定嗎?
SurePAGE預(yù)制膠在室溫下可以保存6個月。為獲得最佳實驗效果，請2-8℃保存。
10.   {C}如何使用傳統(tǒng)染色脫色方法處理預(yù)制膠?
A. 考馬斯亮藍(lán) R-250 使用微波爐染色:
1) 配制染色液：在40%乙醇和10%醋酸溶液中溶解終濃度為0.1%（W/V）的考馬斯亮藍(lán)R-250。
2) 配制脫色液：將終濃度為10%（V/V）乙醇、7.5%（V/V）醋酸溶解在一起。
3) 電泳完成后，撬開膠板取出凝膠，然后放入裝有100 ml染色液的染色容器中。
4) 蓋上容器蓋子并放入微波爐中用高熱檔位加熱8分鐘。為了避免危險，請注意不要讓溶液沸騰。
5) 從微波爐中取出染色容器，放在脫色搖床上常溫輕搖5分鐘。
6) 倒掉染色液并用去離子水小心清洗凝膠。
7) 倒掉去離子水，并加入100 ml脫色液。
8) 蓋上蓋子，放入微波爐中用高熱檔位加熱8分鐘。
9) 倒掉脫色液，加入新的脫色液，重復(fù)步驟8。
10) 從微波爐中取出，放在脫色搖床上常溫輕輕震蕩至背景清晰。
B. 考馬斯亮藍(lán) R-250 常規(guī) 染色:
1) 配制染色液：在40%乙醇和10%醋酸溶液中溶解終濃度為0.1%（W/V）的考馬斯亮藍(lán)R-250。
2) 配制脫色液：將終濃度為10%（V/V）乙醇、7.5%（V/V）醋酸溶解在一起。
3) 電泳完成后，撬開膠板取出凝膠，然后放入裝有100 ml染色液的染色容器中。
4) 放于搖床上輕搖1小時。
5) 倒掉染色液并用去離子水小心清洗凝膠。
6) 倒掉去離子水，并加入100 ml脫色液。
7) 放于搖床上輕搖1小時。
8) 更換新鮮脫色液，繼續(xù)放于搖床上脫色1小時。
9） 重復(fù)步驟7、8一次。
10) 更換新鮮脫色液，放于搖床上過夜脫色至次日背景清晰。
 
疑難解答

問題	可能原因	解決方法
條帶變形	上樣孔中有氣泡 或者有凝膠保存緩沖液	加注電泳緩沖液前后，使用注射器吸取緩沖液輕輕沖洗上樣孔，將氣泡吹出。
	樣品蛋白濃度過高	使用上樣緩沖液稀釋蛋白樣品。
條帶拖曳、滯孔	樣品中含有較大顆粒雜質(zhì)如細(xì)胞碎片、菌體碎片）	高速離心后，取上清液電泳。
	蛋白樣品（如包涵體蛋白） 未充分溶解	在樣品中添加額外的十二烷基硫酸鈉硫酸鈉（SDS）或者使用上樣緩沖液稀釋樣品。
高濃度條帶出現(xiàn)在相鄰泳道	上樣時，樣品溢出到相鄰條帶	降低上樣量。發(fā)現(xiàn)溢出時使用緩沖液沖洗上樣孔。
	上樣孔破損	移除制孔梳時加倍小心。發(fā)現(xiàn)上樣孔破損后換用新的凝膠。
	膠板變形	在安裝預(yù)制膠時先移除制孔梳，再固定在電泳槽內(nèi)。
		使用墊片、翻轉(zhuǎn)密封條時注意是否會對凝膠產(chǎn)生過大的壓力，導(dǎo)致凝膠變形。
	凝膠變干，上樣孔萎縮	打開包裝后，防止凝膠干燥。
		為防止凝膠變干，可以盡快裝置到電泳槽內(nèi)，并加注電泳緩沖液。
		懷疑凝膠變干時，可將凝膠在電泳緩沖液中浸泡一段時間，待凝膠恢復(fù)形狀后上樣。
泳道整體成外“八”字形	膠板變形	安裝預(yù)制膠時先移除制孔梳，再固定在電泳槽內(nèi)。
		使用墊片、翻轉(zhuǎn)密封條時注意是否會對凝膠產(chǎn)生過大的壓力，導(dǎo)致凝膠變形。
條帶遷移速度過慢	凝膠底部綠色膠帶未移除	移除綠色密封膠帶。
	凝膠安裝不當(dāng)，電泳槽內(nèi)槽漏液（與外槽有溶液聯(lián)通現(xiàn)象）	檢查內(nèi)槽密封條、墊片等附件是否安裝恰當(dāng)。
		確認(rèn)凝膠安裝位置，重新安裝凝膠。
	電壓設(shè)置有誤，或者使用了不當(dāng)?shù)碾娪揪彌_液	推薦使用140V恒壓條件電泳。
		推薦使用正確濃度的MOPS電泳緩沖液
蛋白條帶前沿模糊	離子干擾（小分子蛋白電泳容易出現(xiàn)此現(xiàn)象）	換用MES電泳緩沖液。
蛋白條帶前沿變黃	電泳緩沖液性能下降，pH降低	換用新鮮配制的電泳緩沖液。
蛋白分離效果不佳	凝膠濃度選擇不當(dāng)	根據(jù)凝膠最佳分離范圍選用不同濃度凝膠。 對于小分子蛋白的分離，請選用較高分離膠濃度的預(yù)制膠產(chǎn)品或者換用專門為小蛋白開發(fā)的預(yù)制膠產(chǎn)品。
	樣品蛋白量超出凝膠分離能力	降低上樣量，將總蛋白量控制在60 μ g以內(nèi)
	樣品含鹽量過高	使用透析、超濾，或者稀釋的方法降低鹽濃度后電泳。
	電泳體系溫度過高	提高電泳緩沖液用量。
		或者使用冰袋對緩沖液降溫降溫、在低溫環(huán)境中進(jìn)行電泳實驗等方法改善效果。
	MOPS電泳緩沖液性能無法達(dá)到實驗設(shè)計要求	換用MES電泳緩沖液進(jìn)行嘗試。
8%的膠在轉(zhuǎn)膜時粘在膜上	凝膠濃度低、質(zhì)地較軟，轉(zhuǎn)膜時易受熱，與轉(zhuǎn)印膜粘連	添加冰袋、或在低溫環(huán)境中進(jìn)行實驗，控制轉(zhuǎn)膜溫度。
非變性電泳時條帶模糊	非變性電泳由于受蛋白質(zhì)的亞基及電荷量少的影響，存在涌動速度慢、條帶不夠鋒利等現(xiàn)象	優(yōu)化電泳緩沖液配方。
		保證蛋白帶有足夠的電荷量。
		同時注意是否需要調(diào)整電泳儀電源正負(fù)極。